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登革热检测试剂(elisa)

简要描述:

登革热检测试剂(elisa)
Panbio Dengue IgM Capture ELISA 用于定性检测血清中登革热病原的 IgM 抗体,辅助临床实验室诊断出现登革热病毒临床症状的患者。Panbio Dengue IgM Capture ELISA 应该与其它登革热血清测试联用。

更新时间:2020-07-03

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登革热检测试剂(elisa)

Panbio Dengue IgM Capture ELISA

产品目录号 01PE20

预期用途

Panbio Dengue IgM Capture ELISA 用于定性检测血清中登革热病原的 IgM 抗体,辅助临床实验室诊断出现登革热病毒临床症状的患者。Panbio Dengue IgM Capture ELISA 应该与其它登革热血清测试联用。

概述

登革热病毒是黄病毒属,主要分布于热带和亚热带地区。通过蚊子传播,主要是埃及伊蚊和白纹伊蚊。登革热病毒感染可导致一系列的临床症状,从不明显的症状到致死性的出血性疾病。典型登革热或断骨热的特征是突然发热、剧烈头痛、肌痛、关节痛和皮疹。双相发热病程常见失眠和厌食,失去味觉或口苦。登革出血热和登革休克综合征都是严重的并发症,通常与感染第二种血清型有关。利用 ELISA 方法检测登革热病毒的 IgM 抗体是非常重要的程序,尤其是对于继发性登革热病毒感染,继发性感染患者并发症的发生几率较高。尽管检测水平在感染后八个月仍存在,登革热出现三至五天后便可检测到血清 IgM 抗体且通常可持续 30-90 天。

检测原理

血清中存在的登革热病毒 IgM 抗体,与微孔测试条上聚苯乙烯表面附着的抗人 IgM 抗体结合。用抗原稀释剂将浓缩的登革热 1-4 型抗原溶液稀释到正确的工作容积。用昆虫细胞表达系统产生抗原,用特异性单克隆抗体纯化抗原。在稀释后的抗原中添加等体积的辣根过氧化物酶HRP)标记单克隆抗体MAb),成抗原 MAb 复合物。清洗测定板上的剩余血清,将抗原 MAb 复合物添加到测定板中。在培养完成后清洗微孔,再添加无色的底物系统- 四甲基联苯胺/过氧化氢TMB 显色液。底物被酶水解后,显色液变蓝。用酸终止反应后,TMB 变黄。显色表示测试样本中存在抗登革热 IgM 抗体。

 

提供的材料

注意:01PE21 =01PE20x5

  • 抗人 IgM 包被微孔板-12x8 微孔板由抗人IgM 抗体包被。即用型。未使用的微孔应该立即重新密封并储存于干燥环境中。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。
  • 登革热 1-4 型抗原重组 - 1 瓶,无色瓶盖,包含 150μL蓝色浓缩的 1 型、2 型、3 型和 4 登革热病毒抗原。未使用的稀释抗原必须丢弃。浓缩抗原在有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。
  • 清洗缓冲液20 倍) - 1 瓶,60mL 20 倍浓缩磷酸盐缓冲盐水pH 7.2 – 7.6),含吐温 20 和防腐剂(0.1% Proclin™。低温可能结晶。若去除结晶,可在 37℃孵育液体至澄清。混合均匀。用 19 体积的蒸馏水稀释 1 体积的清洗缓冲液。稀释后的缓冲液可在 2-25℃储存一周。

 

4.  样本稀释剂2 瓶, 50 mL粉色。即用型。Tris 缓冲生理盐水pH 7.2 – 7.6),含防腐剂0.1% Proclin™和添加剂。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

5. 抗原稀释剂 – 1 瓶,50mL无色)。即用型。磷酸盐缓冲液,含防腐剂0.1% Proclin™0.005%

庆大霉素)。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

6.  HRP 标记单克隆抗体示踪剂 1 瓶,7mL黄色)。即用型。辣根过氧化物酶HRP标记单克隆抗体示踪剂,含防腐剂0.1% Proclin™和蛋白稳定剂。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

7.  TMB 显色液TMB - 1 瓶,15mL。即用型。3,3’,5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢的混合物,存放于枸橼酸盐缓冲液中pH 3.5 – 3.8。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

8.  阳性质控品1 瓶,黑色瓶盖,200μL 人血清0.1%叠氮话钠0.005%硫酸庆大霉素。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

9.  校准品1 瓶,橙色瓶盖,400μL 人血清0.1%叠氮0.005%硫酸庆大霉素。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

10.  阴性质控品1 瓶,白色瓶盖,200μL 人血清0.1%叠氮0.005%硫酸庆大霉素。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

11. 终止液 – 1 瓶,红色瓶盖,15mL。即用型。1M 磷酸。有效期内储存于 2-25℃可保持稳定。

Proclin™ 300 Rohm Haas 公司的注册商标。

需要但未提供的材料

1. 精确、可调节的微量移液器,含一次性吸液头5-1000 μL 容积

2. 去离子水

3. 标板清洗系统

4. 酶标仪,含 450nm 滤波器

5. 计时器

6. 刻度量筒

7. 烧瓶

8. 试管或微滴定板,用于稀释血清

9. 稀释抗原的玻璃管或塑料管

注意事项

用于体外诊断

1. 在制备质控品的过程中使用的所有人源性材料已经过人类免疫缺陷病毒 1/2HIV 1/2)抗体、丙肝

HCV和乙肝表面抗原的检测,结果为阴性。但是,任何测试方法都不能完全确信,且所有人源性质控品和抗原都应按照潜在传染性材料处理。疾病控制和预防中心以及美国国立卫生研究院建议将潜在传染原按照生物安全二级 1 处理。

2. 该测试只能使用血清执行。尚未建立使用全血、血浆或其它标本基质的方法。

3. 不可使用黄疸或脂血症血清,以及出现溶血或微生物生长的血清。

4. 不可加热,否则血清将失去活性。

5. 在开始检测前所有试剂必须平衡至室温20-25℃)。检测受温度变化的影响。微孔板在达到室温

20-25℃)之前不可从密封袋中取出。

6. 直接用干净的吸液头从试剂瓶中吸出试剂。转移试剂可能导致污染。

7. 未使用的微孔应该立即重新密封并储存于干燥环境中。 否则将产生错误结果。

 

8. 底物系统:

(a) 由于 TMB 易受金属离子的污染,所以底物系统不能与金属表面接触。

(b) 避免长时间阳光直射。

(c) 有些清洁剂可干扰 TMB 的性能。

(d) TMB 可能呈现淡蓝色,这不影响底物的活性或测定结果。

9. 某些试剂盒组成包含叠氮叠氮可能与铅或铜管反应形成极易爆炸的金属叠氮化合物。通过管道装置处理这些试剂时,请用大量清水冲洗以避免叠氮化物在排水管内累积。

叠氮还抑制酶标物的活性。在添加酶标物时必须使用干净的吸液头,避免携带其它试剂的叠氮

 

登革热检测试剂(elisa)

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