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登革热IgG间接法检测试剂-澳洲PANBIO进口

简要描述:

登革热IgG间接法检测试剂-澳洲PANBIO进口
血清中存在的登革热病毒抗体,与微孔测试条上聚苯乙烯表面附着的登革热抗原结合物相结合。洗去剩余的血清并添加过氧化物酶标记的抗人 IgG 抗体。清洗微孔,再添加无色的底物系统 - 四甲基联苯胺/过氧化氢(TMB 显色液)。底物被酶水解后,显色液变蓝。用酸终止反应后,TMB 变黄。显色表示测试样本中存在登革热 IgG 抗体。

更新时间:2020-07-03

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登革热IgG间接法检测试剂-澳洲PANBIO进口

 

Panbio Dengue IgG Indirect ELISA

产品目录号 01PE30

预期用途

Panbio Dengue IgG Indirect ELISA 用于定性检测登革热病原血清型123 4血清中的 IgG 抗体, 辅助临床实验室诊断出现临床症状或既往感染登革热病毒的患者。 

概述

虫媒病毒中的登革热属通过蚊子传播,主要是埃及伊蚊和白纹伊蚊。登革热病毒感染,与伤寒病有关,其特征是突然发热、剧烈头痛、肌痛、关节痛和皮疹。登革热感染的严重并发症包括登革出血热和登革休克综合征。此类并发症的发病率增加与继发性感染不同登革热血清型有关。

通过ELISA 对四种登革热血清型的 IgG 类特异性抗体进行检测,是一种诊断既往感染登革热病毒的患者的重要方法。 配对血清中 IgG , 水平不断升高是活动性登革热感染的表现。传统上,血凝抑制试验HAI滴度被用于划分原发性或继发性感染。当前的界定方法是采用及时分离至少 7 天的配对血清标本检测,急性标本的 HAI 滴度1:2560 被认为患者感染了继发性黄病毒 1 

检测原理

血清中存在的登革热病毒抗体,与微孔测试条上聚苯乙烯表面附着的登革热抗原结合物相结合。洗去剩余的血清并添加过氧化物酶标记的抗人 IgG 抗体。清洗微孔,再添加无色的底物系统 - 四甲基联苯胺/过氧化氢(TMB 显色液。底物被酶水解后,显色液变蓝。用酸终止反应后,TMB 变黄。显色表示测试样本中存在登革热 IgG 抗体。

提供的材料

1. 登革热抗原血清型 123 4包被微孔板-12x8 。即用型。未使用的微孔应该立即重新密封并储存于干燥环境中。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

2. 清洗缓冲液20 倍) - 1 瓶,60mL 20 倍浓缩磷酸盐缓冲盐水pH 7.2 – 7.6),含吐温 20 和防腐剂

0.1% Proclin™)。低温可能结晶。若去除结晶,可在 37℃孵育液体至澄清。混合均匀。用 19 体积的蒸馏水稀释 1 体积的清洗缓冲液。稀释后的缓冲液可在 2-25℃储存一周。

3. 样本稀释剂2 瓶, 50 mL粉色。即用型。Tris 缓冲生理盐水pH 7.2 – 7.6),含防腐剂0.1% Proclin™和添加剂。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

4. HRP 标记抗人 IgG – 1 瓶,15mL绿色。即用型。辣根过氧化物酶HRP标记山羊抗人 IgG含防腐剂0.1% Proclin™和蛋白稳定剂。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

5. TMB 显色液TMB - 1 瓶,15mL。即用型。3,3’,5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢的混合物,存放于枸橼酸盐缓冲液中pH 3.5 – 3.8。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

6. 阳性质控品1 瓶,红色瓶盖,200μL 人血清0.1%叠氮话钠0.005%硫酸庆大霉素。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

7.  校准品1 瓶,黄色瓶盖,400μL 人血清0.1%叠氮0.005%硫酸庆大霉素。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

8. 阴性质控品1 瓶,绿色瓶盖,200μL 人血清0.1%叠氮0.005%硫酸庆大霉素。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

9. 终止液 – 1 瓶,红色瓶盖,15mL。即用型。1M 磷酸。有效期内储存于 2-25℃可保持稳定。 

Proclin™ 300 Rohm Haas 公司的注册商标。

需要但未提供的材料

1. 精确、可调节的微量移液器,含一次性吸液头5-1000 μL 容积

2. 去离子水

3. 标板清洗系统

4. 酶标仪,含 450nm 滤波器

5. 计时器

6. 刻度量筒

7. 烧瓶

8. 试管或微滴定板,用于稀释血清

 注意事项

用于体外诊断

1. 在制备质控品的过程中使用的所有人源性材料已经过人类免疫缺陷病毒 1/2HIV 1 /2抗体、丙肝

HCV和乙肝表面抗原的检测,结果为阴性。但是,任何测试方法都不能完全确信,且所有人源性质控品和抗原包被微孔板都应按照潜在传染性材料处理。疾病控制和预防中心以及美国国立卫生研究院建议将潜在传染原按照生物安全二级 2 处理。

2. 该测试只能使用血清执行。尚未建立使用全血、血浆或其它标本基质的方法。

3. 不可使用黄疸或脂血症血清,以及出现溶血或微生物生长的血清。

4. 不可加热,否则血清将失去活性。

5. 在开始检测前所有试剂必须平衡至室温20-25℃)。检测受温度变化的影响。微孔板在达到室温

20-25℃)之前不可从密封袋中取出。

6. 直接用干净的吸液头从试剂瓶中吸出试剂。转移试剂可能导致污染。

7. 未使用的微孔应该立即重新密封并储存于干燥环境中。否则将产生错误结果。

8. 底物系统:

(a) 由于 TMB 易受金属离子的污染,所以底物系统不能与金属表面接触。

(b) 避免长时间阳光直射。

(c) 有些清洁剂可干扰 TMB 的性能。

(d) TMB 可能呈现淡蓝色,这不影响底物的活性或测定结果。

1. 某些试剂盒组成包含叠氮叠氮可能与铅或铜管反应形成极易爆炸的金属叠氮化合物。通过管道装置处理这些试剂时,请用大量清水冲洗以避免叠氮化物在排水管内累积。

2. 叠氮还抑制酶标物的活性。在添加酶标物时必须使用干净的吸液头,避免携带其它试剂的叠氮

3. 根据适用的欧洲共同体EC指令,产品组成的危害信息如下:

 

组成

危害性质

清洗缓冲液 20 倍浓缩液

刺激性 R36/38, R43

 

 

 

TMB 显色液

刺激性 R36/37/38

终止液

刺激性 R36/38

样本稀释剂

刺激性 R36/38, R43

Dengue IgG Indirect 抗人 IgG HRP 酶标物

刺激性 R36/38, R43

Dengue IgG Indirect 抗原包被微孔板

没有危害

 

Dengue IgM Indirect 阳性质控品

有害 R22, R32, R43

 

 

Dengue IgG Indirect 校准品

有害 R22, R32, R43

Dengue IgG Indirect 阴性质控品

有害 R22, R32, R43

 

如需更多安全信息,请参考 STANDARD DIAGNOSTICS, INC.的安全数据表(SDS)。

 

标本采集和制备

静脉穿刺获取的血液应该置于室温20-25℃)下直到凝块形成,再按照临床实验室标准化研究院CLSI的《认可标准——诊断用血液标本的静脉穿刺采集程序,H3》离心。应该尽快分离血清。如果在 2 天内不进行检测,血清应该 2-8℃冷藏或者低于或等于- 20℃冷冻储存。不推荐使用自解冻冷冻机储存血清。不推荐使用黄疸血清,以及出现溶血、脂血或微生物生长的血清。CLSI 提供了储存血液标本的建议,《认可标准——血液标本的处理加工程序,H18》。

检测程序

注: 确保所有试剂在开前平衡至室20-25℃)范围以外能产生无时间必须复。

 

 

登革热IgG间接法检测试剂-澳洲PANBIO进口

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