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登革热抗原NS1早期检测试剂

简要描述:

登革热抗原NS1早期检测试剂
登革热病毒是黄病毒属,主要分布于热带和亚热带地区。世界上一半以上的人口居住于具有登革热潜在传播风险的地区,登革热是导致人类发病和死亡最严峻的虫媒病毒疾病 1。登革热病毒有 4 种不同但抗原相关的血清型,通过蚊(主要是埃及伊蚊、白纹伊蚊传播和波利尼西亚斑蚊)传播。

更新时间:2020-07-03

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登革热抗原NS1早期检测试剂

 

Panbio Dengue Early ELISA

产品目录号 01PE40

 

预期用途

Panbio Dengue EARLY ELISA 是一种登革热NS1 抗原捕获 ELISA。 用于定性检测血清中的 NS1 抗原, 辅助临床实验室诊断出现登革热临床症状的患者。 Panbio Dengue EARLY ELISA 应该与其它登革热血清诊断法联用。

 

概述

登革热病毒是黄病毒属,主要分布于热带和亚热带地区。世界上一半以上的人口居住于具有登革热潜在传播风险的地区,登革热是导致人类发病和死亡最严峻的虫媒病毒疾病 1。登革热病毒有 4 种不同但抗原相关的血清型,通过蚊主要是埃及伊蚊、白纹伊蚊传播和波利尼西亚斑蚊)传播。

 

登革热病毒感染的临床表现各不相同,从亚临床表现到致命。依据严重程度,该疾病被分为以下等级:非特异性发热疾病,典型登革热,登革出血热DHF)(1 级和 2 ,和登革休克综合征DSS)(3 4 1。典型登革热的特征是突然发热并至少伴随以下 2 种症状:头痛、眼眶后疼痛、肌痛、关节痛、皮疹、出血表现或白血球减少症 2。双相发热病程常见失眠和厌食,失去味觉或口苦。DHF DSS 是严重的潜在致命性并发症,通常与感染第二种血清型有关 3

登革热的早期诊断允许进行早期的支持疗法和监控。这降低了 DHF DDS 等并发症发生的风险,尤其是在登革热流行的国家 4

通过ELISA 检测登革热NS1 抗原是一种非常重要的方法,因为它能够在血清转化之前进行感染检测。 从发病后的第 1 天直到第 9 天都能在血清中检测到NS1 抗原 5,6,7见图示。这区别于 IgM 抗体,因为 IgM 抗体直到发病后 3-5 天后才检测得到。继发性登革热病毒感染的特征是高 IgG , 水平且其峰值检测窗口是在发病后的 6-15 天。这可能伴随着 IgM 水平升高 10,11Panbio Dengue IgG Capture ELISA 用于检测登革热感染的 IgG 抗体水平相对于阈值特异性升高。该试验不用于检测既往感染引起的低水平 IgG 抗体,这种情况通常见于地方性流行区的较多人群。为了为准确地从发病后的不同阶段诊断登革热患者,应该使用Panbio Dengue EARLY ELISA (01PE40)Panbio Dengue lgM Capture ELISA (01PE20) Panbio Dengue lgG Capture ELISA (01PE10)三者相结合的方法。

检测原理

血清中存在的登革热 NS1 抗原,与微孔板上聚苯乙烯表面附着的抗 NS1 抗体相结合。洗去剩余的血清并添加 HRP 标记的抗 NS1 单克隆抗体。在培养完成后清洗微孔,再添加无色的底物系统 - 四甲基联苯胺/ 过氧化氢TMB 显色液。底物被酶水解后,TMB 显色液变蓝。用酸终止反应后,TMB 变黄。显色表示测试样本中存在登革热NS1 抗原。

 

提供的材料

  • NS1 抗体包被微孔板12x8 孔)- 微孔板由抗 NS1 抗体包被。即用型。未使用的微孔应该立即重新密封并储存于干燥环境中。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。
  • HRP 标记抗 NS1 单克隆抗体1 瓶,15mL橙色。 辣根过氧化物酶HRP标记抗 NS1 单克隆抗体,含防腐剂0.1% Proclin™。即用型。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。
  • 清洗缓冲液20 倍) - 1 瓶,60mL 20 倍浓缩磷酸盐缓冲盐水pH 7.2 – 7.6),含吐温 20 和防腐0.1% Proclin™。低温可能结晶。若去除结晶,可在 37℃孵育液体至澄清。混合均匀。用 19 体积的蒸馏水稀释 1 体积的清洗缓冲液。稀释后的缓冲液可在 2-25℃储存一周。
  • 样本稀释剂1 瓶,22mL棕色。即用型。Tris 缓冲生理盐水pH 7.2 – 7.6,含防腐剂0.1% Proclin™和添加剂。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。
  • TMB 显色液TMB - 1 瓶,15mL。即用型。3,3’,5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢的混合物,存放于枸橼酸盐缓冲液中pH 3.5 – 3.8。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。
  • 阳性质控品1 瓶,紫色瓶盖,1.2mL 重组抗原(0.1%Proclin™0.005%硫酸庆大霉素。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。
  • 校准品2 瓶,橙色瓶盖,1.5mL 重组抗原(0.1%Proclin™0.005%硫酸庆大霉素。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

 

8. 阴性质控品1 瓶,白色瓶盖,1.2mL 人血清0.1%叠氮0.005%硫酸庆大霉素)。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

  • 终止液 – 1 瓶,红色瓶盖,15mL。即用型。1M 磷酸。有效期内储存于 2-25℃可保持稳定。

 

Proclin™ 300 Rohm Haas 公司的注册商标。

 

需要但未提供的材料

1. 精确、可调节的微量移液器,含一次性吸液头5-1000μL 容积

2. 去离子水

3. 标板清洗系统

4. 酶标仪,含 450nm 滤波器

5. 计时器

6. 刻度量筒

7. 烧瓶

8. 用于稀释的试管或微滴定板

 

注意事项

用于体外诊断

  • 在制备质控品的过程中使用的所有人源性材料已经过人类免疫缺陷病毒 1 2HIV 1 2抗体、丙HCV和乙肝表面抗原的检测,结果为阴性。但是,任何测试方法都不能完全确信,且所有人源性质控品和抗原都应按照潜在传染性材料处理。疾病控制和预防中心以及美国国立卫生研究院建议将潜在传染原按照生物安全二级 12 处理。
  • 该测试只能使用血清执行。尚未建立使用全血、血浆或其它标本基质的方法。

3. 不可使用黄疸或脂血症血清,以及出现溶血或微生物生长的血清。

4. 不可加热,否则血清将失去活性。

5. 在开始检测前所有试剂必须平衡至室温20-25℃)。检测受温度变化的影响。微孔板在达到室温

20-25℃)之前不可从密封袋中取出。

6. 直接用干净的吸液头从试剂瓶中吸出试剂。转移试剂可能导致污染。

7. 未使用的微孔应该立即重新密封并储存于干燥环境中。否则将产生错误结果。

8. 底物系统:

(a) 由于 TMB 易受金属离子的污染,所以底物系统不能与金属表面接触。

(b) 避免长时间阳光直射。

(c) 有些清洁剂可干扰 TMB 的性能。


TMB 可能呈现淡蓝色,这不影响底物的活性或测定结果。

9. 某些试剂盒组成包含叠氮,叠氮可能与铅或铜管反应形成极易爆炸的金属叠氮话合物。通过管道装置处理这些试剂时,请用大量清水冲洗以避免叠氮化物在排水管内累积。

10. 叠氮还抑制酶标物的活性。在添加酶标物时必须使用干净的吸液头,避免携带其它试剂的叠氮话钠。

 

登革热抗原NS1早期检测试剂

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