登革热IgM/IgG抗体检测试剂盒

澳洲PANBIO登革热抗原NS1快速检测用于定性的快速检测人群血清、血浆或全血中登革病毒的IgM及IgG抗体。可在15分钟内检测结果。

· 结果快速，15分钟出结果。
· 结果值得信赖，敏感性和特异性均> 90%
· 方式灵活，样本可为全血、血清或血浆
· 能区分出登革的原发感染和继发感染
· 可进行完整的测试，保存方便，常温2-30℃保存

标本采集和制备

静脉穿刺获取的血液应该置于室温（20-25℃）下直到凝块形成，再按照临床实验室标准化研究院（CLSI）的《认可标准——诊断用血液标本的静脉穿刺采集程序，H3》离心。应该尽快分离血清。如果在2天内不进行检测，血清应该2-8℃冷藏或者低于或等于- 20℃冷冻储存。不*使用自解冻冷冻机储存血清。不*使用黄疸血清，以及出现溶血、脂血或微生物生长的血清。CLSI提供了储存血液标本的建议，《认可标准——血液标本的处理加工程序，H18》。

检测程序

注： 确保所有试剂在开始测定前平衡至室温（20-25℃）。在所给时间和温度范围以外进行测试可能产生无效的结果。不在预定时间和温度范围内的测试必须进行重复。

ELISA程序

• 从铝箔袋中取出所需数量的微孔板并插入测试条槽。阴性质控品、阳性质控品和校准品各需5个微孔，一式三份。确保剩下未使用的微孔密封于铝箔袋内。
• 使用适当的试管或微滴定板稀释阳性质控品（P）、阴性质控品（N）、校准品（CAL）和患者样本。
  • 混合10μL血清与1000μL样本稀释剂。混合均匀。 

或者，

• 混合10μL血清与90μL样本稀释剂。取出20μL稀释血清，加入180μL样本稀释剂。混合均匀。

• 吸取100 µL样本稀释剂、质控品和校准品添加至对应的微孔中。
• 盖住测定板并在37°C ± 1°C孵育30分钟。
• 用稀释后的清洗缓冲液洗6次（参考清洗程序）。
• 吸取100 µL HRP标记抗人IgG添加到每个微孔中。
• 盖住测定板并在37°C ± 1°C孵育30分钟。
• 用稀释后的清洗缓冲液洗6次（参考清洗程序）。
• 吸取100 µL TMB添加到每个孔中。
• 在室温（20-25℃）下孵育10分钟，从第①次添加开始计时。蓝色将会显现。
• 按照相同顺序吸取100μL终止液添加到每个孔中，计时同TMB添加步骤。混合均匀。蓝色将变成黄色。
• 在30分钟内读取每个孔在450nm波长的吸光度，参考滤波器为600-650nm。

注： 如果使用双波长分光光度计，将参考滤波器设定在600-650nm之间。在没有参考滤波器的情况下读取450nm的微孔结果可能由于背景原因导致吸光度偏高。

清洗程序

为了清除未复合的样本或成分，有效清洗是ELISA程序的关键步骤。

A.自动洗板机

• *抽净所有微孔。
• 在清洗循环期间将每个孔装满至边缘（350μL）。
• 完成6次清洗后，将测定板倒立于吸水纸巾上用力敲打，确保清除所有清洗缓冲液。
• 为了确保有效清洗，必须维持自动洗板机良好的保养。必须始终遵守厂商的清洁说明。

B.手动清洗

• 将测定板的内含物丢弃到适当的废物容器。
• 用适当的挤压瓶将微孔填满清洗缓冲液。避免清洗缓冲液起泡，否则会降低清洗效率。立即丢弃微孔里的清洗缓冲液。
• 再将微孔填满清洗缓冲液，并立即丢弃。
• 重复步骤（3）4次，共用清洗缓冲液清洗六（6）次。
• 后一次清洗完成后，丢弃微孔的内含物并将测定板置于吸水纸巾上敲打，以确保清除所有清洗缓冲液。

质量控制

每个试剂盒包含校准品，阳性质控品和阴性质控品。这些组成的可接受值参见附带的规格表。阴性质控品和阳性质控品用于监测重大的试剂失败。阳性质控品不能确保测定临界值的精密度。如果质控品或校准品的任一吸光度读数不符合规定，则测试无效且应重新测试。如果测试无效，则不能报告患者结果。必须按照地方、州和/或联邦法规或认证要求以及实验室标准QC程序执行质控（QC）要求。有关适当的QC操作规程指南，建议用户参考CLSI C24-A和42 CFR 493.1256。

预期值和测试局限性

• 必须结合患者的临床体征和症状来做临床诊断。该试剂盒的结果本身并没有诊断作用，应该与其他临床数据和患者症状联用。
• 阳性预测值取决于病毒存在的可能性。只能检测有临床症状或疑似接触过相关病毒的患者。
• 黄病毒属内的血清型交叉反应（登革热1、2、3、4，日本脑炎，西尼罗河病毒，墨累山谷脑炎等）在IgG， 水平上十分常见^3,4,5。在东南亚进行的试验表明90%的日本脑炎患者（n=20）的IgG间接结果大于10 Panbio单位。
• 利用地方人群测定了临界值。 人群血清流行病学在不同地理区域应该随时间而变化。终，临界值需要根据对当地的研究进行调整。
• 尚未确定目测结果判定的性能特征。
• ELISA筛选试验结果表明登革热感染的所有血清必须送到参考实验室进行阳性确认和流行病学记录。

性能特征

用Panbio Dengue IgG Indirect ELISA对386份经过血凝抑制试验（HAI）和ELISA方法的回顾性血清进行检测。这些血清包括来自以下组别的样本：108份血清阴性样本、84份原发性样本、94份继发性样本和100份地方性样本。 通过Panbio Dengue IgG Indirect ELISA 对这些血清样本进行检测并将其结果与血清的登革热感染状态进行对比，从而确定检测的灵敏度、特异性和一致性。  

马来西亚的一所大学通过基于世界卫生组织（WHO）标准的HAI试验将115份血清样本确定为原发性或继发性登革热感染。 该试验组由23份原发性和92份继发性登革热样本构成。

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