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登革热IgG间接法检测试剂盒

简要描述:

登革热IgG间接法检测试剂盒
Panbio Dengue IgG Indirect ELISA用于定性检测登革热病原血清型(1、2、3和4)血清中的IgG抗体,辅助临床实验室诊断出现临床症状或既往感染登革热病毒的患者。

更新时间:2020-07-03

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登革热IgG间接法检测试剂盒

Panbio Dengue IgG Indirect ELISA 

产品目录号01PE30

预期用途

Panbio Dengue IgG Indirect ELISA用于定性检测登革热病原血清型(1234)血清中的IgG抗体辅助临床实验室诊断出现临床症状或既往感染登革热病毒的患者。

 

概述

虫媒病毒中的登革热通过蚊子传播,主要是埃及伊蚊和白纹伊蚊。 登革热病毒感染,与伤寒病有关,其特征是突然发热、剧烈头痛、肌痛、关节痛和皮疹。 登革热感染的严重并发症包括登革出血热和登革休克综合征。此类并发症的发病率增加与继发性感染不同登革热血清型有关。

通过ELISA对四种登革热血清型的IgG类特异性抗体进行检测,是一种诊断既往感染登革热病毒的患者的重要方法。 配对血清中IgG, 水平不断升高是活动性登革热感染的表现。传统上,血凝抑制试验(HAI)滴度被用于划分原发性或继发性感染。当前的界定方法是采用及时分离至少7天的配对血清标本检测,急性标本的HAI滴度≥ 1:2560被认为患者感染了继发性黄病毒1

检测原理

血清中存在的登革热病毒抗体,与微孔测试条上聚苯乙烯表面附着的登革热抗原结合物相结合。 洗去剩余的血清并添加过氧化物酶标记的抗人IgG抗体。清洗微孔,再添加无色的底物系统 - 四甲基联苯胺/过氧化氢(TMB显色液)。底物被酶水解后,显色液变蓝。用酸终止反应后,TMB变黄。显色表示测试样本中存在登革热IgG抗体。

 

提供的材料

  • 登革热抗原(血清型1、2、3和4)包被微孔板-(12x8孔)。即用型。未使用的微孔应该立即重新密封并储存于干燥环境中。有效期内储存于2-8可保持稳定。
  • 清洗缓冲液(20倍) - 1瓶,60mL 20倍浓缩磷酸盐缓冲盐水(pH 7.2 – 7.6),含吐温 20和防腐剂(0.1% Proclin™)。低温可能结晶。若去除结晶,可在37孵育液体至澄清。混合均匀。用19体积的蒸馏水稀释1体积的清洗缓冲液。稀释后的缓冲液可在2-25储存一周。
  • 样本稀释剂 – 2瓶, 50 mL(粉色)。即用型。Tris缓冲生理盐水(pH 7.2 – 7.6),含防腐剂(0.1% Proclin™)和添加剂。有效期内储存于2-8可保持稳定。
  • HRP标记抗人IgG – 1瓶,15mL(绿色)。即用型。辣根过氧化物酶(HRP)标记山羊抗人IgG,含防腐剂(0.1% Proclin™)和蛋白稳定剂。有效期内储存于2-8可保持稳定。
  • TMB显色液(TMB) - 1瓶,15mL。即用型。3,3’,5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢的混合物,存放于枸橼酸盐缓冲液中(pH 3.5 – 3.8)。有效期内储存于2-8可保持稳定。
  • 阳性质控品 – 1瓶,红色瓶盖,200μL人血清(含0.1%叠氮话钠和0.005%硫酸庆大霉素)。有效期内储存于2-8可保持稳定。
  •  校准品 – 1瓶,黄色瓶盖,850μL人血清(含0.1%叠氮话钠和0.005%硫酸庆大霉素)。有效期内储存于2-8可保持稳定。
  • 阴性质控品 – 1瓶,绿色瓶盖,200μL人血清(含0.1%叠氮话钠和0.005%硫酸庆大霉素)。有效期内储存于2-8可保持稳定。
  • 终止液 – 1瓶,红色瓶盖,15mL。即用型。1M磷酸。有效期内储存于2-25可保持稳定。

Proclin™ 300是Rohm 和Haas公司的注册商标。

需要但未提供的材料

  • 精确、可调节的微量移液器,含一次性吸液头(5-1000 μL容积)
  • 去离子水
  • 标板清洗系统
  • 酶标仪,含450nm滤波器
  • 计时器
  • 刻度量筒
  • 烧瓶
  • 试管或微滴定板,用于稀释血清

注意事项

用于体外诊断

  • 在制备质控品的过程中使用的所有人源性材料已经过人类免疫缺陷病毒1/2(HIV 1 /2)抗体、丙肝(HCV)和乙肝表面抗原的检测,结果为阴性。但是,任何测试方法都不能完全确信,且所有人源性质控品和抗原包被微孔板都应按照潜在传染性材料处理。疾病控制和预防中心以及美国国立卫生研究院建议将潜在传染原按照生物安全二级2处理。
  • 该测试只能使用血清执行。尚未建立使用全血、血浆或其它标本基质的方法。
  • 不可使用黄疸或脂血症血清,以及出现溶血或微生物生长的血清。
  • 不可加热,否则血清将失去活性。
  • 在开始检测前所有试剂必须平衡至室温(20-25)。检测受温度变化的影响。微孔板在达到室温(20-25)之前不可从密封袋中取出。
  • 直接用干净的吸液头从试剂瓶中吸出试剂。转移试剂可能导致污染。
  • 未使用的微孔应该立即重新密封并储存于干燥环境中。否则将产生错误结果。
  • 底物系统:
    • 由于TMB易受金属离子的污染,所以底物系统不能与金属表面接触。
    • 避免长时间阳光直射。
    • 有些清洁剂可干扰TMB的性能。
  • TMB可能呈现淡蓝色,这不影响底物的活性或测定结果。累积。
  • 叠氮话钠还抑制酶标物的活性。在添加酶标物时必须使用干净的吸液头,避免携带其它试剂的叠氮话钠

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