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蜱传脑炎病毒lgG抗体检测试剂盒

简要描述:

蜱传脑炎病毒lgG抗体检测试剂盒:蜱传脑炎是一种急性病毒感染,以快速病变为特征,感染后健康状态迅速恶化产生疾病,包括严重的关节痛和发烧。
体温会突然上升,可高达40℃,并伴有寒战。几天后,发烧症状减弱,继而复发,这样周而复始的类似鞍状峰状曲线 体温。

更新时间:2020-06-05

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蜱传脑炎病毒lgG抗体检测试剂盒

【产品名称】

通用名称:蜱传脑炎病毒lgG检测试剂盒(酶联免疫法)

英文名称:Chikungunya IgG micro-capture ELISA

【产品规格】

96T

【预期用途】

试剂盒可用于人血清和血浆(柠檬酸盐)中蜱传脑炎病毒lgG抗体的定性检测。

【前言简介】

蜱传脑炎病毒是一种属于披膜病毒科甲病毒属的节肢动物媒介病毒。披膜病毒科甲病毒属(α-病毒属)至少有24种不同的种属。它们是一类脂质围绕的病毒体,直径约为50-60nm。

α-病毒感染最初是由感染的蚊子叮咬引起的,感染后,病毒借机进入皮下和皮肤组织。1至12天,演变为蜱传脑炎

蜱传脑炎是一种急性病毒感染,以快速病变为特征,感染后健康状态迅速恶化产生疾病,包括严重的关节痛和发烧。

体温会突然上升,可高达40℃,并伴有寒战。几天后,发烧症状减弱,继而复发,这样周而复始的类似鞍状峰状曲线 体温。关节痛主要表现在多关节,主要累及小关节区域的严重受损,随运动增加,疼痛加剧。患者通常应避免移动。关节会肿胀,但无明显关节液体积聚。这类症状持续1周至数月并伴随有肌痛。病发一天会出现皮疹,但也有延迟出现的,然后皮疹漫延至脸部,颈部,演变为斑疹、丘疹或紫癜 ,疹间皮肤多为正常 ,伴有瘙痒感,继而躯干、四肢的伸展侧、手掌和足底出现皮疹。也能观察到瘀斑皮肤受损。头痛,畏光,有明显咽炎,恶心,呕吐的咽喉痛也是病发可能出现的症状。很多情况下,关节痛和多发性关节炎会持续数月仍至数年,常伴有关节受损,更有罕见者,出现包括脑炎,高致命性脑膜脑炎的后遗症。

这类病毒在非洲和亚洲为高发区。20%至90%热带和亚热区人群发现有感染的血清学证据。由于伊蚊在北非和南美急剧横行,这些地带的人群对病毒都有易感性,因此造成爆发疫情的可能性。中欧人群的感染主要是因为一些曾到过热带和亚热带的旅行者携带蜱传脑炎病毒而传染的。

种属

疾病

症状

感染机制

蜱传脑炎病毒

(α-病毒)

蜱传脑炎

发烧

皮疹

关节痛

持续关节痛和

多发性关节炎,有时有关节受损

更有罕见者,出现

脑炎和脑膜脑炎

由蚊虫叮咬

 

白纹伊蚊(非洲)

埃及伊蚊(非洲,亚洲)

病毒感染可由以下方法鉴别

• 血清学: 免疫荧光、酶免法检测相应的抗体

【检测原理】

试剂盒采用酶联免疫法。微孔中预包被有抗人IgG,用于结合样品中相应的抗体。洗板后,去除非结合的样品。再加入蜱传脑炎抗原液,再次洗板后,再加入生物素化的蜱传脑炎抗体。加入链霉亲和素标记结合物(酶联物),与固相的特异性的蜱传脑炎复合物结合。加入TMB底物液后,微孔中显蓝色。显色的强度与病人样品中蜱传脑炎病毒lgG抗体的量成正比。加入终止液终止酶反应,形成黄色终点产物。最后在酶标仪处450 nm读数。

【试剂盒组成成分】

微孔板            12×8

包被有抗人IgG

样品稀释液        1×100 mL

即用型、pH7.2±0.2、黄色、白盖

洗涤液            1×50ml

20倍浓缩、pH7.2±0.2、白盖

蜱传脑炎抗原液  6瓶

冻干品、红盖

蜱传脑炎抗体液  1×6ml

含生物素化蜱传脑炎抗体、即用型、蓝色、白盖

链霉亲和素酶联物  1×6ml

含链霉亲和素标记的HRP、即用型、红色、黑盖

终止液            1×15ml

即用型、含硫酸、浓度0.2mol/L、红盖

底物液            1×15ml

即用型、黄盖

阳性质控          1×1.5ml

即用型、黄色、红盖

临界质控          1×2ml

即用型、黄色、绿盖

阴性质控          1×1.5ml

即用型、黄色、蓝盖

封板纸

支架

所需材料(未提供)

·酶标仪(450/620 nm)

·恒温箱(37 ℃)

·洗瓶或自动洗板机

·移液管(规格10和1000 µL)

·震荡器

·去离子水或蒸馏水

·一次性试管

·计时器

【储存条件】

试剂盒存于2~8℃,能稳定保存至有效期,有效期见标签 。

【样品要求】

试验采用人血清或血浆(柠檬酸盐)。收集的样品在2~8℃可保存5天。更长时间,分成小份,冻存于(-20~-70℃)。 冻存样品,试验前应完全解冻。避免反复冻融。

不建议使用热灭活样品

样品稀释

试验前样品应稀释:1个单位的样品+100个单位的样品稀释液,如10µL样品+1mL样品稀释液,在试管中旋涡摇匀。

【检测方法】

试剂准备

试验前,将所有试剂,样品,质控品平衡至室温(20~25℃)

蜱传脑炎抗原:

每瓶加入1mL稀释洗涤液溶解,缓慢加入,室温下静置温育15min,制成即用型抗原液。此抗原液在2~8 ℃可稳定保存1天。

洗涤液:

1个单位的浓缩洗涤液+19个单位的双蒸水。

如:10mL浓缩洗涤液+190 mL双蒸水。稀释洗涤液在室温下能稳定保存5天。开瓶后,浓缩的洗涤液在2~8℃可稳定保存至有效期.

检测步骤

试验前,仔细阅读说明书。严格执行说明书要求才能得到优良结果。如试验使用自动洗板机,建议每孔350µL,洗板5次(如手工洗,则每孔300µL,洗板3次)。试验前,确定好样品,质控品的加样布局方案。取所需板条置于板架上。

至少设

1孔(如A1)         空白对照

1孔 (如B1)          阴性质控

2孔 (如C1+D1)      临界质控

1孔(如E1)         阳性质控

如觉得有必要,建议样品和质控品都作双份检测。

试验应按同样的加样顺序加取试剂,避免不同的时间间隔造成误差。

使用新的一次性加样枪头,加各质控品,样品

调节恒温箱为37±1℃

  • 加50µL质控品和稀释样品至相应各孔中,设A1作为空白对照
  • 封板纸盖板
  • 37 ± 1 温育1小时±5分钟
  • 温育后,移除封板纸,倒出微孔内液体,每孔用300µL稀释洗涤液,洗板3次,避免洗涤液相互溢溅至其它微孔。每次洗板时,浸泡时间应大于5秒。最后,在吸水纸上拍干,去除残留液滴。

注意:洗涤步骤很关键。不充分的洗板,会导致不精确或错误上升的吸光度值。

  • 除空白对照孔(A1)外,加50µL蜱传脑炎液抗原液至各孔,盖板
  • 室温下育30分钟
  • 重复步骤4
  • 除空白对照孔(A1)外,加50µL 蜱传脑炎液抗体液至各孔,盖板
  • 室温下育30分钟
  • 重复步骤4
  • 除空白对照孔(A1)外,各加50µL链酶亲和素酶联物至各孔,盖板
  • 室温下育30分钟
  • 重复步骤4
  • 加100 µL TMB底物液至各孔中
  • 黑暗处,精确温育15分钟
  • 按加TMB底物液的顺序和速度,加100 µL终止液至各孔中。

蓝色溶液在孵育过程中变为黄色。

注意:强阳性样品会导致色原产生沉淀,沉淀的产生会对读数产生影响。所以先用阴性基质进行预稀释,建议1:1的比例稀释,然后,再1个单位的预稀释样品+100个单位的样品稀释液。最终结果(以U计算)乘以预稀释因子2即可

  • 加入终止液后,30分钟内在酶标仪450/620 nm处读数

【结果计算】

用A1空白对照孔对酶标仪进行调零

如遇技术问题,酶标仪不能调零。 所测样品的吸光度值减去空白对照的读数值,

即可得到较可靠的读数。

在酶标仪处450 nm处测读所有质控品和样品的吸光度值。620 nm作为参考波长。

如进行双孔检测,计算吸光度均值。

实验有效性标准

如试验有效,必须满足以下要求

·空白对照(A1):       吸光度值<  0.100

·阴性质控(B1):       吸光度值<  临界读数

·临界质控(C1+D1)     吸光度值   0.150~1.300

·阳性质控(E1)        吸光度值>  临界读数

如上述标准没满足,试验视为无效,试验应重测。

结果计算

临界读数是双孔临界质控的吸光度均值

示范: 临界吸光度值0.39 +临界吸光度值0.37=0.76 / 2 = 0.38

即吸光度值=0.38

结果分析说明

样品吸光度值高于临界读数的10 %视为阳性结果。

样品吸光度值在临界读数的±10 %范围内视为灰色可疑区

建议2-4周后,重新取新鲜的样品进行试验。如试验结果仍为灰色可疑区,视

为阴性结果

样品吸光度值低于临界读数的10%视为阴性结果

结果以U表示

病人吸光度均值×10        

--―――――――  = [Units=U]

临界指数

示范: 1.216×10   

       -------------   =32 U(Units)

         0.38

临界:    10 U

灰区:    9-11 U

阴性:    <9 U

阳性:    >11 U

【注意事项】

  • 试剂仅供体外诊断和专业人士使用。
  • 在检测开始之前,仔细和完整的阅读说明书,使用试剂盒提供的说明书的有效版本,确保所有的程序都清楚。
  • 如果试剂盒有破坏的请与IBL公司联系或是提交您的投诉单,但自您拿到试剂盒后最迟不超过一个星期。在检测时请不要使用受损的试剂,并妥善保管好以备投诉时使用。
  • 按照批号和有效期,不要混合使用不同批号的试剂,也不要使用过期的试剂。
  • 遵守实验室优化管理规则和安全指南,穿实验服,带橡皮手套,有必要时请戴护目镜。
  • 这种试剂盒中含有会伤害眼睛和皮肤的有害试剂,请阅读材料来源和标签获取详细信息。产品的材料安全数据能够从IBL公司主页上载可直接咨询IBL公司获取。
  • 根据国家生物有害物质及安全条例,所有化学药品和准备或使用过的试剂都应当做有害物质进行处理。
  • 避免接触终止液,以免刺激或灼烧皮肤。
  • 试剂盒中部分试剂含有叠*化钠作为防腐剂,一旦与皮肤或者眼睛发生接触,立即用大量清水冲洗. *氮化钠可能会与铅和铜的管道发生反应,形成爆炸性的金属叠氮化物。当处理试剂时,使用大量水冲洗以防止叠氮化物的形成。
  • 试剂盒中的所有试剂包括检测过的人血清/血浆对HIV/II,HbsAg和HCV都表现为阴性,但是试剂中会出现此类病毒(HIV/II,HbsAg和HCV)或其他具有感染性的病原体的可能性都不能完全被排除。因此,所有的试剂在使用和处理的过程中都应当作潜在生物有害物质进行处理。

操作注意事项

1. 样品的不合理处理及实验操作的任何改动都将影响实验的结果。取样体积、温育时间、预处理步骤都必须严格按说明进行。只能使用标准取样器和标准设备。

2. 一旦实验开始,所有的步骤都必须完整的进行下去,不允许中断。在使用前,将所有试剂和样品都平衡至室温(18-25℃),轻轻摇动液体试剂和样品,试剂混合过程中要避免气泡。

3. 避免污染试剂、取样器、微孔/试管。加试剂和样本时,请使用新的取样吸头。不要交换瓶盖。盖好不使用的试剂。不要重复使用微孔/试管或者试剂。

4. 用定标仪对反应板进行校准。

5. 温育时间会影响实验结果。微孔加样的顺序和时间都必须*。建议使用8孔微量取样器给微孔加样。

6. 微量板的清洗非常重要,微孔清洗不好将会形成错误的实验结果。建议使用多孔取样器或自动微孔清洗设备进行清洗。每次温育间隔期间要避免微孔干燥。加洗涤液和吸液时要避免碰到包被孔。清洗和加试剂时都应特别小心。清洗时,在微孔中精确的加入洗涤液缓冲液,同时确保微孔中无残渣。

7. 湿度会影响包被板,所以在未到达室温时请勿打开包装,未使用的包被板要重新密封于装有干燥剂的包装袋中。   

蜱传脑炎病毒lgG抗体检测试剂盒

 

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