甲/乙型流感病毒抗原检测试剂盒

使用说明书

【产品名称】

通用名称：甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）

英文名称：Alere BinaxNOW® Influenza A&B Card

【包装规格】

22人份/盒

【预期用途】

本产品用于体外定性检测人鼻咽拭子标本中的甲、乙型流感病毒核蛋白抗原。

甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）是一种体外免疫层析试验，可快 速地对甲、乙型流感病毒感染做出辅助鉴别诊断。

试验简介

流感是发生在呼吸道的具有高度传染性的急性病毒感染，它属于传染病范畴，可通过咳嗽或打喷嚏时排出的带有活病毒的气溶胶而在人与人之间传播。每年的秋季和冬季都可爆发流感甲型流感病毒的流行性比乙型流感病毒的流行性要强，造成的病情也更严重，并且大多数严重的流感也都是由它引起的，而乙型流感则相对比较缓和。

针对甲、乙型流感的快速诊断试验对获取有效的抗病毒治疗是很有意义的。对流感 做出快速诊断不但可减少病人住院的天数，减少抗菌素的使用，而且可减少病人的住院费用。

甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）提供了一种用鼻咽拭子标本对甲 型和乙型流感进行简便快速诊断的方法；使用方便，结果快速，在急诊检验中提供的信息可帮助医生选择治疗方案并做出是否需要收住院的决定。

甲型流感病毒有许多亚型,有些亚型可在鸟类中发现。1997年*报道人类甲型禽流感（H5N1，主要发生于鸟类的一种流感病毒亚型），此后，在人群中出现了 H5N1 病例，使人们对H5N1关注起来，H5N1的变异使得它更易在人群间传播，由于备案的禽流感感染病人比例很低，快速试验在该类病人治疗中的利用度尚不得知。

【检验原理】

甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂（胶体金法）使用的是薄膜免疫层析技术，它利用具有高度敏感性的单克隆抗体来检测鼻咽拭子标本中的甲型和乙型流感病毒的核蛋白抗原，这些单克隆抗体连同一种对照抗体分别被固定到膜支持物上，形成三条*的线。膜支持物跟其他试剂/垫结合在一起构成检测条。检测条位于一个称作检测卡的书铰链状的纸板中。

拭子标本需要进行预处理：用洗脱液、盐水或转移介质等将标本从拭子中洗脱出来, 将标本加到检测条顶端，闭合检测卡，15分钟时根据是否出现紫红色样品线来报告结果。 在有效试验中，蓝色对照线变为粉红色。

【主要组成成分】

提供的材料

1. 检测卡：22人份。包含对甲型流感病毒核蛋白抗原具有高度特异性的单克隆抗体、 结合有胶体金颗粒的对甲型流感病毒核蛋白抗原具有高度特异性的单克隆抗体、对乙型流感病毒核蛋白抗原具有高度特异性的单克隆抗体、结合有胶体金颗粒的对乙型流感病毒核蛋白抗原具有高度特异性的单克隆抗体、兔抗羊IgG、结合有胶体金颗粒的羊IgG。

2. 吸管：22份，吸管的体积是固定的（100μl）,用于向检测卡中加标本用。只能使用 随试剂盒提供的吸管或经过校准能转移100μl标本体积的吸管。

3. 阳性对照拭子：1份，将灭活的甲型流感病毒和灭活的乙型流感/哈尔滨（即乙型流 感病毒）干燥结合到拭子上。

4. 阴性对照拭子：1份，灭活的A群链球菌干燥结合到拭子上。

5. 对照拭子用洗脱液小瓶：2瓶，小瓶中含约0.5mL洗脱液，用于处理测试的对照拭子。

不包含但试验必需的组分（可单独购买）

鼻咽拭子附件包：

鼻咽拭子：甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）使用的是无菌拭子，可用其他带弹性柄的无菌鼻咽拭子代替，详见标本采集和处理部分。

拭子标本用洗脱液小瓶：1瓶，小瓶中盛有约0.5mL洗脱液，用于预处理测试用的拭子 标本。转移介质或盐水可代替洗脱液使用，详见标本采集和处理一介质转移章节。

建议使用但未提供的材料

时钟、秒表或跑表；鼻洗液/冲洗液采集器。

【储存条件及有效期】

2〜30°C保存，有效期为24个月。

生产日期及失效日期见包装标签。试剂成份在失效期前较稳定，禁止使用过期试剂。 包装打开后，未用的检测卡应立即放回盛干燥剂的包装袋中密封保存。

【样本要求】

使用新鲜收集的标本做试验，收集的标本量不足或标本的处理和转运不合适，可能会产生假阴性结果。

鼻咽拭子

使用弹性柄的无菌棉花、人造纤维,泡沫、聚酯鼻咽拭子釆集鼻咽标本，本试验建议不使用澡酸钙拭子. '

标本采集后I小时内洗脱拭子标本，尽快测试。在用本试剤盒进行检测前洗脱下来的拭子标本可在2~8℃保存24小时。如有需要，可在2〜8℃用防漏容器运送标本。

在用本试剂盒进行检测前要将所有标本平衡至室温，轻轻旋转混匀。

转运介质

下列介质经过测试，可用于本试剂盒的检测。

Amies培养基
心脑浸液
Dulbecco培养基
Hank’s平衡盐液

M4培养基

M4-RT培养基

M5培养基

M6培养基

磷酸盐缓冲液

盐水 Stuart's培养基

胰蛋白磷酸盐肉汤

UTM-RT培养基

小牛浸液

 蔗糖磷酸盐缓冲液已确定不适用于本试验。

【检验方法】

标本预处理

用转运介质洗脱鼻咽拭子

在0.5到3.0mL的盐水或转移介质中用力搅动拭子以洗脫拭子。对可选用的转移介质参见标本采集和处理部分。进入检测程序。

用试剂盒中的洗脱液洗脱拭子（对照拭子和样本拭子）:

2. 将待测试拭子插入试验瓶，将拭子在液体中用力转动3圈。

3. 在将拭子从瓶中取出前，将拭子在瓶壁上挤压转动，使标本从拭子中移出。

4. 丢弃拭子。

5. 尽可能早地用本试剂盒对测试瓶中的液体标本进行检测。进入检测程序。

 检测程序

1.测试前将检测卡从包装袋中取出，平放在工作台上。

2.挤压移液管上的吸球并把移液头插入标本中，当吸头在标本 中时松开吸球，将液体吸到管中。确保管的下部没有空气。

3.根据检测卡上的箭头找到检测条上部的白色样品垫，将移液 管中的全部液体（100卩L）慢速（逐滴）加到垫的中部，使 所有标本都吸附到垫中。请勿将标本加到紫红色垫上。

4.立即揭去检测卡上的粘附衬，将检测卡封闭，15分钟时读取

窗口中的结果。早于15分钟或晚于15分钟的结果可能不准确。

注意：读结果时，如有必要可癖检测板倾斜以减少结果窗口中的亮光。

【检验结果的解释】

对阴性结果，窗口底部的蓝色对照线变为紫左色，而无其他线出现。

Pink Control Line

对甲型流感阳性标本，蓝色对照线变为紫红色，且它上边的中间那条标本线也变为紫红色，只要有标本线出现，即使颜色很浅，结果也是阳性的。

Pink Sample Line ；

Pink Control Line

对乙型流感阳性标本，蓝色对照线变为紫红色，且它上部上边的那条标本线也是紫红色的，只要有标本线出现，即使颜色很浅，结果也是阳性的。

Pink Sample Line

Pink Control Line

如果对照线仍为蓝色或根本就没有出现，不管标本线出现与否，结果都为无效。用新的检测卡重新检测。

【检验方法的局限性】

阴性结果不能排除存在甲和/或乙型流感感染的可能性，因此，对甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）获得的结果要与临床检查相结合，以便做出准确的诊断。如若需要其他能区分甲型和乙型流感病毒特异亚型或株的试验，请向国家或地方卫生部门垂询。

甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）能检测甲型和乙型流感的死病毒和活病毒，试验性能取决于标本中的抗原载量，可能与同一份标本的细胞培养结果无相关性。

甲型和乙型流感病毒在靶表位区氨基酸的微小改变都可能造成单克隆抗体不能检测或检测敏感性下降。

甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）监测抗病毒治疗的性能尚未确立。

体外诊断试验的阴性和阳性预测值对疾病的流行性依赖非常大，假阴性结果更可能出现在疾病流行性很强的峰活动期，假阳性结果更可能出现在轻中度流行性的低病毒活动期。

不建议使用肉眼可见的含血液的标本进行本试剂盒的检测。

用鼻吸入法接种甲型流感疫苗的个体，接种后三天内用流感快检试剂检测，可出现

阳性结果。

儿童排出病毒的的数量和排毒持续时间都超过成年人，因此，成年人对流感体外诊 断的敏感性要低于儿童。

【产品性能指标】

预期值

流感的流行年年不同，典型爆发主要发生在秋冬季「流感检测的阳性率取决于许 多因素，包括标本采集方法，使用的检测方法，地理位置和疾病在特定区域的流行。甲 型流感与大多数严重的流感流行密切相关，而乙型流感却缓和的多。在2004年呼吸道 疾病高发季节在美国以外的国家，以及在2004-2005呼吸道疾病高发季节在美国国内进 行了多中心临床研究，甲型流感的平均流行率是18% （用病毒细胞培养确定），乙型流 感的平均流行率是3%₀

临床性能

2004年呼吸道疾病高发季节，在美国以外的一家中心实验室进行了多中心、前瞻性 的临床研究，2005-2006年呼吸道疾病高发季节，在美国国内三家实验机构也进行了同 样的研究，通过这些研究确立了甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）的操作 特性。在美国南部、东北部、中东部地区的多家医生研究室、诊所、医院以及瑞典的一 家医院从有症状的病人中收集了临床标本，进行了冻存，并对这些冻存标本进行了回顾 性研究。

临床研究

甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）试验性能与细胞培养/DFA比较一前瞻 性研究

总共从儿童（小于18岁）和成人（大于等于18岁）中收集了 846份标本用甲型/ 乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）进行了前瞻性的评估，并与培养/DFA进行 了比较，检测人群中男性占44%,女性占56%,儿童为54%,成人占46%。病人的性别和年龄对试验性能无影响，A/H3和A/H1是此时钏要流感亚型。

甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）技验性能和细胞培养/DFA在标本类型和95%可信区间方面的比较如下所示。

甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法》与细胞培养/DFA在甲型流感检测性能 方面的比较

检测敏感性                                 

标本        +/+ —/+敏感性% 95%可信区间

甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）与细胞培养/DFA在乙型流感检测性能 方面的比较

检测敏感性                                                      检测特异性

标本            +/+  —/+敏感性% 95%可信区间    —/— +/—特异性% 95%可信区间

鼻咽拭子     2       2        50%   9-91%              346 0 * 99-*

甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）检测性能与细胞培养/DFA比较一回顾 性研究

用甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）对293份冰冻标本进行评估， 并与培养/DFA进行了比较。所有标本都采自美国南部、东北部、中西部地区的多家医 生研究室、诊所、医院，以及瑞典一家医院中有症状的病人，测试人群中53%是男性， 47%是女性；未成年人（小于18岁）占62%,成年人（大于等于18岁）占38%。病人 年龄、性别及标本类型对试验结果无影响。

甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）和细胞培养/DFA在标本类型和95% 可信区间方面的比较如下所示。

甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）与细胞培养/DFA在甲型流感检测性能 方面的比较

检验敏感性 检验特异性

标本     +/+一/+敏感性% 95%可信区间      —/— +/— 特异性% 95%可信区间

鼻咽拭子 19 8 70% 50-86% 77 9 90% 81-95%

甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）与细胞培养/DFA在乙型流感检测性能 方面的比较

检验敏感性 检验特异性

标本      +/+—/+敏感性% 95%可信区间  —/— +/— 特异性% 95%可信区间

鼻咽拭子   0        0   N/A                 N/A           111     2 98%            93-*

分析敏感性

本试剂盒的检出限的定义是能检出95%的阳性结果的流感病毒浓度。通过对不同浓度的灭活甲型流感/北京、灭活乙型流感/哈尔滨的评估，确定了本试剂盒的检出限。

12个操作者对每个浓度各测试2次，即每个水平测定24次。下面的结果确定甲型流感/北京的检出限为1.03×10²ng/mL,乙型流感/哈尔滨的检出限为6.05 × 10¹ng/mL。

分析反应性

下列所列甲型和乙型流感株在*的浓度用甲型/乙型靈感病就抗原检测试剂盒 （胶体金法）检测结果是阳性的。虽然引起人类感染的特定流感株年年都有变异，但都含有本试剂盒所检测的保守核蛋白靶位²。甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）检测人类标本中甲型流感病毒的操作特性是在H1和H3亚型流行时确立的。其他作为人类致病原出现的甲型流感病毒亚型的试验操作特性尚未确立。

脑膜炎奈瑟氏菌

千燥奈瑟氏菌

浅黄色奈瑟氏菌

普通变形杆菌

铜绿假单胞菌

黏质沙雷菌

金黄色葡萄球菌

金黄色葡萄球菌（产Cowan蛋白A株）

表皮葡萄球菌

A群链球菌

B群链球菌

C群链球菌

F群链球菌

变异链球菌

肺炎链球菌

干扰物质

下列自然存在于呼吸道标本中的物质或人为因素导入鼻腔或鼻咽部的物质在下列浓度用甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）进行了评估，没发现对试验性能产生影响。全血（1%）不妨碍对本试剂盒阴性结果的解释，但是妨碍对甲型流感阳性标本检出限的解释，因此，血标本对本试验可能不适宜。

物质 浓度

4—acetamidophenol                Omg/mL

乙酰水杨酸 15mg/mL

Albuterol 20 mg/triL

捕尔敏 5 mg/mL

美沙芬 10 mg/mL

Diphenhydramine 5 mg/mL

20 mg/mL

转运介质

将下列转运介质作为阴性标本（无病毒存在）用甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）进行了测试，并在接种检出出限水平的甲型和乙型流感后同样进行了测试。培养基不影响本试剂盒的试验性能，用本试剂盒单独检测培养基时结果是阴性的，接种了检出限水平的甲型和乙型流感病毒的培养恥本迳剂盒检测中结果是阳性的。

心脑浸液

                                                                  Dulbecco培养基

                                                                   Hank's盐平衡液

M4培养基

                                                                 M4-RT培养基

M5培养基

M6培养基

磷酸盐缓冲液
盐水

Stuarfs Media

Tryptose磷酸盐肉汤

                                                                 UTM-RT培养基

小牛浸液

现已确知蔗糖磷酸盐缓冲液不适用于本试验。

重复性研究

分别在三家机构对阴性、弱阳性和阳性标本随机分组用甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）进行单盲研究，参与者在三天中每天都对每份标本做多次测定, 与预期结果的符合率为97% （242/250）,批内（由1个操作者重复测试）、批间（三天间）、机构间（三家机构）、操作者间（六个操作者）无显著性差别。

【注意事项】

1. 体外诊断用。

2. 使用前将检测卡密封在包装袋中。

3. 禁止使用过期的试剂盒。

4. 禁止将不同试剂盒中的成分混和使用。

• 检测条上部的白色样品垫含有从病毒中萃取靶抗原的试剂，为使操作醉佳化，将标 本慢慢（逐滴）地加到此垫的中部，以使所有标本都吸到垫中。
• 用于制造对照拭子的溶液都用标准方法灭活过，可是，病人标本、对照品，检测卡 等仍应作为能传播疾病的物质处理。
• 如果根据卫生机构*的当代临床和流行病学检测标准，有新的疑似甲型流感感染时，   应当用适宜的感染控制措施收集毒力强的新型流感病毒标本，送国家或地方卫生部门检测。除非有可接收这种标本并对之进行培养的BSL3+ （3级生物安全试验室）设备，请勿对这些病例试图做病毒培养。
• 当加到检测卡中的标本量不足时可产生无效结果加样准确，在将移液管中的液体加到检测卡的样品垫上的时候，要确保移液管下部是充盈的，不含气体。如果含有气体，将标本排回到容器中；通过挤压上部的吸球将标本重新吸回到管中，必要时换一支新的移液管。

9. 所有移液管和洗脱液小瓶都是一次性使用物品，禁止用于多份标本。

10. 甲型流感病毒的操作特性是在A/H3和A/H1是主要甲型流感传播病毒的时候建立起来的，其它甲型流感病毒出现后，操作特性可能会不同。

11. 该试验对禽流感的检测能力是用培养的禽流感病毒确定的，该试验对从感染H5N1 或其他禽流感的人中收集的标本的操作特性尚不得知。

甲/乙型流感病毒抗原检测试剂盒