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MP HIV1+2型抗体确证试剂(免疫印迹法)

简要描述:

MP HIV1+2型抗体确证试剂(免疫印迹法):将HIV蛋白经SDS-PAGE,由于蛋白分子大小不同而分离开来,然后再把这些已分离的不同蛋白带转移到硝化纤维膜上,以后用不同的方式,包括非常敏感的免疫酶法,检测HIV抗体。

更新时间:2020-06-05

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MP HIV1+2型抗体确证试剂(免疫印迹法)

产品介绍:

1)原理wB是将HIV蛋白经SDS-PAGE,由于蛋白分子大小不同而分离开来,然后再把这些已分离的不同蛋白带转移到硝化纤维膜上,以后用不同的方式,包括非常敏感的免疫酶法,检测HIV抗体。每一条硝化纤维膜上均含有经电泳分离过的HIV抗原。若有相应抗体就会与硝化纤维膜条上的抗原带相结合。然后与抗人的IgG酶结合物反应。在底物作用下,硝化纤维膜条带上呈现紫色,表示阳性反应。

2)基本检测程序

(1)准备试剂:配制稀释洗涤液、印迹缓冲液、工作酶结合溶液。 

(2)湿润膜条:用镊子从塑料管中小心取出所需的硝化纤维膜条,其中包括3条对照(强阳性、弱阳性、阴性对照各1条),并且将有编号的膜面向上放入分析槽中,随后加人2 ml已经稀释好的洗液,室温(22~28)振荡浸泡至少5 min,然后吸干槽内液体。

(3)加样:每槽中加入2 ml印迹缓冲液和20ul待检标本或对照血清(每个标本都需换新的移液头)。

(4)孵育:盖上盖子,室温振荡1 h(也可采用室温振荡16~18 h)。

(5)洗涤:小心打开盖子,吸干槽内液体,避免标本交叉污染。加入2 ml已经稀释的洗涤液,室温浸泡振荡5 min,再吸干槽内液体。如此反复洗涤3次。

(6)酶结合:加入2 ml工作酶结合溶液,盖上盖子,室温振荡1 h(如果在6步骤中采用室温振荡16~18 h的,则此步酶反应步骤中室温振荡30 min)。

(7)洗涤:吸干槽内液体,再洗涤3次。

(8)显色:加入2 ml底物溶液,室温振荡15 min。

(9)终止:吸干槽内液体,加入蒸馏水终止反应,反复3次,随后用镊子小心取出膜片于滤纸巾上,并开始读膜片结果。

(10)结果判定标准:每次实验须设立对照血清,如阳性对照必须全部条谱带均出现;弱阳性对照可以谱带不全,但必须够判定阳性的结果;阴性对照则无反应谱带。如果对照血清的结果未出现正确的谱带,则此次实验无效,须重做。同时,每条膜片上有一血清条带,此带未出现说明有可能漏加标本;那么此条带为无效实验,也须重做。

(11)结果判定:阴性标本,在膜片上不出现有颜色的谱带。阳性血清标本可在膜上呈现水平的深紫色谱带。小分子量蛋白谱带在膜片下端,高分子量的谱带在膜片上端。谱带颜色的深浅与血清中HIV抗体的浓度呈正比。典型的反应谱带可参照标准图谱判断(试剂盒中备有)。

中国疾病预防控制中心2004:年版的《全国艾滋病检测技术规范》WB检测的判定标准如下。

HIV-1抗体阳性:至少有2条env带(gp41和gpl60/gpl20)出现;

至少有1条env带和P24带同时出现。

HIV-1抗体阴性:无抗体特异带出现。
HIV-1抗体不确定:出现HIV特异性抗体带,但带型不足以确认阳性的。

上述标准为判读WB检测结果的基本原则,在实际工作中还应参照所用试剂的说明综合判断,遇疑难情况应报上级实验室解决。

如膜片上出现特异性HIV-2 gp36带,则须进一步用检测HIV-2抗体的WB药盒进一步检测。HIV-2抗体血清学阳性:至少有2条env带(gp36和gpl40/gpl50)。HIV-2抗体阴性和HIV-2抗体不确定的判断,类同于HIV-1的判断。

MP HIV1+2型抗体确证试剂(免疫印迹法)

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