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IBL百日咳杆菌IgM检测试剂

简要描述:

百日咳杆菌毒素 IgM ELISA:酶联法定性及定量测定人血清或血浆中百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)毒素(PT) IgG 抗体水平。基于夹心法固相酶联吸附检测(ELISA)原理。微孔板空中包被抗原,样品中含有针对抗原特异结合抗体(人IgG)则可以通过二次酶联抗体(E-Ab)检测到,加入显色底物,酶解反应显色,颜色深浅与检测吸附的 IgG 水平成正比,以此通过颜色判断。

更新时间:2019-05-08

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IBL百日咳杆菌IgM检测试剂
 

1. 用途

酶联法定性及定量测定人血清/血浆中百日咳杆菌毒素(PT) IgG 抗体水平。

2. 摘要

百日咳是一种由百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)引起的呼吸道疾病,可以通过空气传播传播。 革兰氏阴性杆菌会产生一系列生物活性分子,这些化合物或在致病或在针对百日咳的免疫过程中出现,并表现出不同的影响。其中百日咳毒素(pt)、丝状血细胞凝集素(fha)和不同脂多糖(lps)等已进行了表征研究。

百日咳显示高传播率(未接种疫苗的家庭成员的感染率超过 90%)并且可导致严重疾病,特别是对于幼儿。1980 年至 1989 年一年内的 10749 名患者中,69%被送入医院,22%患有肺炎,0.9%患有脑病,0.6%死于肺炎。对于年龄较大的儿童和成人包括已接种疫苗的人也通过不明显支气管炎或上呼吸道发炎观察到感染。无症状的病例也很常见。

百日咳疾病或百日咳疫苗免疫后的血清学反应采用凝集试验、沉淀素,补体结合和酶联免疫吸附试验(ELISA) 测定。 对于 ELISA 测定,博德特氏菌抗原(包括毒素,FHA 和 LPS, U/ml)与固相支持物结合,方法灵敏、易于操作,测定单一血清的血清阳性并通过测定IgM 和 IgA 来判断最近博德特氏菌感染情况。

与其他博德特氏菌属蛋白相比,百日咳毒素(PT)具有高度特异性。 PT 也是众多疫苗的组成部分。

3. 检测原理

基于夹心法固相酶联吸附检测(ELISA)原理。微孔板空中包被抗原,样品中含有针对抗原特异结合抗体(人IgG)则可以通过二次酶联抗体(E-Ab)检测到,加入显色底物,酶解反应显色,颜色深浅与检测吸附的 IgG 水平成正比,以此通过颜色判断样品中IgG 的存在,并通过标曲定量测定IgG 的浓度水平。

4. 注意事项

1. 仅供研究专业用途使用。

2. 检测前,完整仔细阅读随试剂盒内附的有效版本说明书,确保充分理解全部内容。

3. 若试剂盒包装破损,请于收到试剂盒一周内书面联系 IBL 或供货商。不要使用破损的试剂进行检测。

4. 采用同批次同效期试剂进行检测,不同批次的试剂不得混用。不要使用过期试剂。

5. 遵守良好实验室操作规范及安全指南,必要时穿戴实验服、一次性乳胶手套及护目镜。

6. 试剂盒中有害成分接触后可能刺激眼睛和皮肤。详情见盒内材料MATERIALS SUPPLIED 及标签。另外,IBL 网上也提供了产品相关《Material Safety Data Sheets》供下载,或直接寻求 IBL 索取。

7. 化学品及制备或使用过的试剂必须当作有害废物依照国家生物有害及安全指南或法规进行处理。

8. 清洁人员在处理潜在有害物品时应有专业人士指导。

9. 避免接触终止液,否则可能引起皮肤过敏及灼伤。

10. 部分试剂含叠氮钠(NaN3防腐剂。若接触眼睛或皮肤,立即用水冲洗。NaN3 可与铅和铜管发生反应形成具有爆炸性的叠氮金属物。因此,处理试剂时,要用大量水冲洗避免叠氮物质的积累。

11. 试剂盒中含有人血清或血浆的试剂均经过检测,显示抗 HIV I/IIHBsAg 及 抗 HCV 均为阴性。尽管如此, 但不能绝对排除这些及其他传染因子的存在,因此使用及处理时,应按潜在生物有害物处理。

5. 保存及稳定性

试剂盒常温条件运输,保存应在 2-8 °C。远离热源或阳光照射。样本及制备试剂的保存与稳定性在后面相应章节有述。

未开封的试剂在注明的效期内稳定。试剂盒初次开封后,微孔板装在密封袋密封及试剂瓶盖紧放在 2-8 °以稳定保存 个月。

6. 样品采集与保存

血清、血浆 (EDTA, 肝素处理)

遵照常规静脉采血注意事项。从采血开始直至检测时段保持血样化学属性完整性是十分重要的。检测时避免采用发生重度溶血、黄疸或严重脂血症的样品。外观浑浊的样品检测前要进行离心去除颗粒物。

保存:

2-8 °C

-20 °C

远离热源和日光照射 

稳定性:

> 7 

避免反复冻融

7. 试剂盒内提供的物品

 

数量

标识

组分

1 x 12 x 8

MTP

微孔板

 

可拆卸板条,包被有特定抗原。

 

 

1 x 15 mL

 

ENZCONJ IgG

酶联 IgG

 

红色瓶盖,即用试剂。内含:抗人 IgG 且偶联过氧化物酶的抗体

含蛋白的缓冲液, 0.01 %甲基异噻唑啉酮, 0.01 % 溴硝基二噁烷

及 5 mg/L ProClin

 

 

 

1 x 4 x 2 mL

 

CAL A-D

 

标准品 A-D

 

0; 25; 50; 150 IU/mL. 即用试剂。

 

标准品 A = 阴性对照

标准品 B = 阈值判断对照

标准品 C = 弱阳性对照

标准品 D = 阳性对照

标准品按国际单位 (IU) WHO 标准 06/140 进行过校正

内含: 抗百日咳毒素(PT)的 IgG 抗体及 PBS 稀释过的人血清、

0.01 %甲基异噻唑啉酮及 0.01 %溴硝基二噁烷。

1 x 60 mL

DILBUF

稀释缓冲液

 

即用试剂。内含: PBS 缓冲液、BSA, < 0.1 % NaN3

1 x 60 mL

WASHBUF

 

CONC

浓缩洗液 (10x)

 

内含: PBS 冲液、吐温 20

 

1 x 15 mL

TMB SUBS

TMB 底物液

 

即用试剂,内含四甲基联苯胺(TMB)。

1 x 15 mL

TMB STOP

TMB 终止液

 

即用试剂, 0.5 M H2SO4.

 

2 x

FOIL

粘性铝箔

 

供孵育时盖住微孔板使用。

 

1 x

BAG

塑料袋

 

密封袋,用于未使用板条的干燥保存。

8. 需要但未提供的实验材料

1. 微量移液器 (Eppendorf 多通道移液器或类似产品, < 3% CV),量程: 5、 50100500 µL

2. 校正过的检测装置

3. 用于样品稀释的管子 (1 mL)

4. 8 通道微量移液器,及试剂储槽

5. 洗瓶、自动或半自动洗板机

6. 酶标仪,可以读取 450 nm (校正波长 600-650 nm的吸光值

7. 双蒸水或去离子水

8. 吸水纸巾、移液枪头、计时器

 

9. 操作注意事项

1. 任何不当处理样品或修改测试程序都可能影响结果。 要求的移液量、孵育时间、温度和预处理步骤必须严格按照说明书进行。 仅使用经过校准的移液器和检测设备

2. 测试开始后,所有步骤都应该不间断地完成。 确保在适当的时间准备好所需的试剂、材料和设备。 允许所有试剂和样品达到室温18-25oC,并在使用前轻轻旋转每瓶液体试剂和样品。 混合试剂不要起泡

3. 避免污染试剂,移液器和孔/管。 为每个组份和样品移取时使用新的一次性塑料移液器吸头。 瓶盖不要互换。未使用的试剂瓶要始终盖上。 不要使用用过的板孔/试管或试剂

4. 使用移液方案验证合适的板布局

 

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