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德国IBL寨卡病毒抗体IgM检测试剂

简要描述:

德国IBL寨卡病毒抗体IgM检测试剂可用于人血清和血浆(柠檬酸盐)中寨卡病毒IgM抗体的定性检测。

更新时间:2019-04-29

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德国IBL寨卡病毒抗体IgM检测试剂

【产品名称】

通用名称:寨卡病毒IgM检测试剂盒(酶联免疫法)

【产品规格】

96T/盒

【预期用途】

试剂盒可用于人血清和血浆(柠檬酸盐)中寨卡病毒IgM抗体的定性检测。

 

【检测原理】

试剂盒采用酶联免疫法。微孔中预包被有抗人IgG,用于结合样品中相应的抗体。洗板后,去除非结合的样品。再加入寨卡病毒原液,再次洗板后,再加入生物素化的寨卡病毒抗体。加入链霉亲和素标记结合物(酶联物),与固相的特异性的寨卡病毒合物结合。加入TMB底物液后,微孔中显蓝色。显色的强度与病人样品中寨卡病毒IgM抗体的量成正比。加入终止液终止酶反应,形成黄色终点产物。最后在酶标仪处450 nm读数。

【检测方法】

试剂准备

试验前,将所有试剂,样品,质控品平衡至室温(20~25)

寨卡病毒抗原:

每瓶加入1mL稀释洗涤液溶解,缓慢加入,室温下静置温育15min,制成即用型抗原液。此抗原液在2~℃可稳定保存1天。

洗涤液:

1个单位的浓缩洗涤液+19个单位的双蒸水。

如:10mL浓缩洗涤液+190 mL双蒸水。稀释洗涤液在室温下能稳定保存5天。开瓶后,浓缩的洗涤液在2~8℃可稳定保存至有效期.

检测步骤

试验前,仔细阅读说明书。严格执行说明书要求才能得到优质结果。如试验使用自动洗板机,建议每孔350µL,洗板5次(如手工洗,则每孔300µL,洗板3次)。试验前,确定好样品,质控品的加样布局方案。取所需板条置于板架上。

至少设

1孔(如A1)         空白对照

1孔 (如B1)          阴性质控

2孔 (如C1+D1)      临界质控

1孔(如E1)         阳性质控

如觉得有必要,建议样品和质控品都作双份检测。

试验应按同样的加样顺序加取试剂,避免不同的时间间隔造成误差。

使用新的一次性加样枪头,加各质控品,样品

调节恒温箱为37±1

  • 50µL质控品和稀释样品至相应各孔中,设A1作为空白对照
  • 封板纸盖板
  • 37 ± 1 温育1小时±5分钟
  • 温育后,移除封板纸,倒出微孔内液体,每孔用300µL稀释洗涤液,洗板3次,避免洗涤液相互溢溅至其它微孔。每次洗板时,浸泡时间应大于5秒。最后,在吸水纸上拍干,去除残留液滴。

注意:洗涤步骤很关键。不充分的洗板,会导致不精确或错误上升的吸光度值。

  • 除空白对照孔(A1)外,加50µL基孔肯雅热液抗原液至各孔,盖板
  • 室温下30分钟
  • 重复步骤4
  • 除空白对照孔(A1)外,加50µL 基孔肯雅热液抗体液至各孔,盖板
  • 室温下30分钟
  • 重复步骤4
  • 除空白对照孔(A1)外,各加50µL链酶亲和素酶联物至各孔,盖板
  • 室温下30分钟
  • 重复步骤4
  • 100 µL TMB底物液至各孔中
  • 黑暗处,精确温育15分钟
  • 按加TMB底物液的顺序和速度,加100 µL终止液至各孔中。

蓝色溶液在孵育过程中变为黄色。

注意:强阳性样品会导致色原产生沉淀,沉淀的产生会对读数产生影响。所以先用阴性基质进行预稀释,建议1:1的比例稀释,然后,再1个单位的预稀释样品+100个单位的样品稀释液。最终结果(以U计算)乘以预稀释因子2即可

  • 加入终止液后,30分钟内在酶标仪450/620 nm处读数

【结果计算】

用A1空白对照孔对酶标仪进行调零

如遇技术问题,酶标仪不能调零。 所测样品的吸光度值减去空白对照的读数值,

即可得到最可靠的读数。

在酶标仪处450 nm处测读所有质控品和样品的吸光度值。620 nm作为参考波长。

如进行双孔检测,计算吸光度均值。

实验有效性标准

如试验有效,必须满足以下要求

·空白对照(A1):       吸光度值<  0.100

·阴性质控(B1):       吸光度值<  临界读数

·临界质控(C1+D1)     吸光度值   0.150~1.300

·阳性质控(E1)        吸光度值>  临界读数

如上述标准没满足,试验视为无效,试验应重测。

结果计算

临界读数是双孔临界质控的吸光度均值

示范: 临界吸光度值0.39 +临界吸光度值0.37=0.76 / 2 = 0.38

即吸光度值=0.38

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